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顯微測微尺及其使用

一、顯微測微尺及其使用 

()認(rèn)識顯微測微尺 

       顯微測微尺是在顯微鏡下測量生物細(xì)微結(jié)構(gòu)的測微工具,通常用它測量細(xì)胞各部分的大小、厚薄和面積。 

顯微測微尺(見下圖)包括目鏡測微尺(目尺)和物鏡測微尺(臺尺),測量時(shí)須將其配合使用方可達(dá)到測量目的。

      目鏡測微尺(直線式)為一圓形玻片,直徑為2021mm,玻片中央有一橫線刻有大小格的等距離線。

      物鏡測微尺為一特制的玻片,中央圓圈內(nèi)有一1mm長分為100個(gè)等距小格的刻線,每一小格即10μm。 

(二)使用方法 

用目尺來測量細(xì)胞大小時(shí),因?yàn)樗目潭葲]有具體長度,所以必須先用臺尺核實(shí)目尺每一格的長度。具體方法如下:

1)從顯微鏡上取下目鏡,卸下目鏡的上部透鏡,將目尺輕輕地加在光圈板上(注意別放倒了),再旋上目鏡的上透鏡。

2)將臺尺的刻度面向上,放在鏡臺上夾好,調(diào)節(jié)焦距,使臺尺刻度清晰可見。

3)細(xì)心移動臺尺和轉(zhuǎn)動目尺,使兩尺平行,并使左邊的一直線重合。然后由左向右找出兩尺的另一重合的直線(如下圖所示)。

4)記錄下兩條重合線間目尺和臺尺的格數(shù),按下列公式,計(jì)算出目尺每格等于多少um

目尺每格的長度(μm

     (兩重合線間臺尺的格數(shù) / 目尺的格數(shù))×10

例如右圖臺尺一格等于目尺5格,

目尺每格長度=1/5×10μm2μ

(三)顯微測微尺的應(yīng)用 

顯微測微尺是用來測量生物細(xì)微結(jié)構(gòu)的測微工具。

       直線式測微尺通常用來測量細(xì)胞及各部分大小。如測定洋蔥鱗片葉表皮細(xì)胞、酵母、花粉、孢子、孢子囊、單細(xì)胞藻類的大?。ㄩL度和寬度)。

       網(wǎng)格式測微尺還可以用來測量面積或計(jì)數(shù)。 

二、血球計(jì)數(shù)板的使用 

血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造 

      血球計(jì)數(shù)板是由一塊厚玻片特制而成,其中央有兩個(gè)計(jì)數(shù)室。每個(gè)計(jì)數(shù)室劃分出9個(gè)大方格(見下圖),每格面積1mm2,加蓋玻片后的深度為0.1mm。因此,每大方格容積為0.1mm3。另外,中央大方格以雙線等分為25個(gè)中方格。每個(gè)中方格又分16個(gè)小方格,供細(xì)胞計(jì)數(shù)用。 

                                  計(jì)  數(shù)   

         首先用吸管吸取少許稀釋一定倍數(shù)的(稀釋度為每小格510個(gè)細(xì)胞為宜)單細(xì)胞懸液,從蓋片端滴一小滴(不宜過多),液體自行向內(nèi)滲入,靜置數(shù)分鐘后,再放在微鏡下觀察計(jì)數(shù)。一般選取計(jì)數(shù)室內(nèi)四個(gè)角及中央五個(gè)中方格(80小方格)計(jì)數(shù),若細(xì)胞位于小方格的線上,應(yīng)遵循數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線的原則,以減少誤差。計(jì)數(shù)應(yīng)重復(fù)3次,取其平均值。由于菌液處于不同的空間位置,要在不同的焦距下才能看得見,因此必須不斷調(diào)節(jié)細(xì)螺旋,才能找到全部菌體。數(shù)完畢后,依下式計(jì)算:

       1mL懸液細(xì)胞數(shù)=80個(gè)小方格細(xì)胞總數(shù) / 80

         ×400×10000×稀釋倍數(shù) 

課本實(shí)驗(yàn):

材料:5%新鮮酵母液(或已經(jīng)培養(yǎng)一至數(shù)天的酵母液)

計(jì)數(shù)方法:

      用已滅菌的滴管吸取培養(yǎng)液,滴一滴在血球計(jì)數(shù)板上,蓋上蓋玻片,在顯微鏡下進(jìn)行鏡檢。至少數(shù)300個(gè)細(xì)胞。用細(xì)胞除以這些細(xì)胞所分布的方格數(shù),即每個(gè)方格的平均細(xì)胞數(shù)。

 

     每毫升細(xì)胞總數(shù) == 平均細(xì)胞數(shù) × 250000

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